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如何正确解冻、存放胎牛血清?

发布日期:2024-05-29 17:28:25

   胎牛血清是细胞培养中常用的天然培养基,因为胎牛未进食过母乳,所以 IgG 含量低,且含有丰富的细胞生长必须的营养成分,故目前多数实验人员选择的都是胎牛血清进行动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。图片1.png

✔ 提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。

✔ 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。

✔ 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。

✔ 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

✔ 起酸碱度缓冲液作用。

✔ 提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。

血清存放和解冻是实验中必备的操作。小编今天带大家一起来看下如何解冻和存放血清?

. 如何储存和解冻血清?

未拆封的血清,一般情况下应存放于-10℃至-20℃,在产品规定的效期内均可使用,若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至合适大小的无菌离心管内,再放回冷冻。

将血清从冷冻冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融,或通过水浴锅促使其溶解。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。完全溶解后建议尽快使用,若长时间储存在2-8℃,血清中的各种(脂)蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可见的混浊。

. 解冻后发现有絮状沉淀物,该怎么处理?

胎牛血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解冻后,也会存在于胎牛血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响胎牛血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物,可以将胎牛血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。
解冻胎牛血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若胎牛血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。解冻胎牛血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。请勿将胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,胎牛血清会变得混浊,同时胎牛血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响胎牛血清的质量。胎牛血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。若必须做胎牛血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。

. 如何避免血清中产生沉淀?

1.解冻时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一;

2.分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡);

3.切勿由-20℃直接至37℃水浴锅解冻,较大的温差,易造成蛋白质凝结而发生沉淀;

4.切勿将血清置于37℃过长时间,否则可能使之浑浊,其中一些不稳定的组分也会因此受到影响,最终降低血清的品质;

5.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤;

6.若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且保持摇晃均匀。温度过高、时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

 


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