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​揭秘|血清中的沉淀是何物?

发布日期:2025-03-21 15:53:24

血清中含有丰富的营养物质,包括各种蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,其中一些物质在特定的条件下容易形成沉淀。无论血清产地、品质如何,血清冻融后产生沉淀是无法避免的,因此各类血清以及含有血清的产品都可能会产生沉淀。

一、血清沉淀是什么?

在血清解冻后发现浑浊及絮状物质时,不必惊慌,这是正常现象。常见血清的沉淀物有以下几种:

纤维蛋白(Fibrin)纤维蛋白.jpg

血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中,血清采集、过滤(3次0.1μm过滤)和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集形成肉眼可见的沉淀。

磷酸钙(Calcium Phosphate)

常见的一种沉淀物,会造成血清浑浊,并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点,并且由于布朗运动看上去像在活动,因此经常被误认为是微生物污染。

其他成分(Other)

血清中的其他成分也会形成沉淀,例如胆固醇和其他蛋白沉淀等。 

二、血清沉淀是污染吗?

前面提到过磷酸钙在倒置显微镜下像小幅振动的小黑点,容易被误认为是微生物污染,但其实血清沉淀并不是污染。

由于在37℃的温度下培养,会加剧磷酸钙颗粒产生,故空培血清验证污染的方法也不太合理。

我们可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养,观察是否存在细菌增殖,并且进行革兰氏染色,观察判断是否为微生物污染。

三、血清沉淀会影响细胞生长吗?

血清出现沉淀是血清的正常特性,各大品牌的血清均有沉淀的出现,根据逍鹏多年细胞培养测试经验,血清沉淀的多少与血清的使用效果没有必然关系。
建议更换新批次血清的时候,取少量细胞进行试培养,以确定是否影响后续细胞生长。

四、为了减少血清絮状物沉淀的出现,在使用过程中一定要注意以下细节:

1. 解冻血清时,建议不时将血清摇晃均匀,目的是使温度及成分均一,减少絮状物沉淀的发生;

2. 勿直接将血清由-20℃置37℃解冻,因为这样温度变化太大,很容易造成蛋白析出;建议将血清从冷冻室先移至2-8℃冰箱解冻,再放置于室温进行彻底解冻;

3. 严禁将血清在37℃长时间孵育解冻,否则血清可能会产生沉淀,同时,血清中许多较不稳定的成分也会因此受到破坏,从而影响到血清的品质;

4. 血清热灭活容易造成沉淀物增多,若非必要,可以无需进行此步骤;

5. 若必须要做血清的热灭活,也请遵循56℃,30min的原则,并且不时摇晃均匀,因为温度过高,时间过久或者摇晃不均匀都会造成沉淀物的增多。

五、如何去除血清中沉淀

非生物污染因素产生的血清沉淀,不会影响血清本身的功能,但从使用体验角度出发,大量的沉淀很容易遮挡视线,影响对培养基状态的观察;而微量沉淀又容易与细胞污染混淆,影响实验人员的判断。

因此,如果血清中有非生物污染的沉淀,想要去除,该如何操作呢?

我们推荐采用低速离心的方法:1000rpm以内,1-2分钟,或简单让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。

一般不推荐过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。解冻方式.jpg

六、总结

血清产品中出现沉淀属于常见现象,无需过多担心,并且不会影响血清的品质,对细胞培养而言,也是没有任何问题的,您可以放心使用。


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