Bend.3 小鼠脑微血管内皮细胞株

细胞名称:Bend.3 小鼠脑微血管内皮细胞株

货号：WS20009（种属鉴定）

规格：1×10⁶cells/T25培养瓶

细胞介绍

细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。

一、细胞特性

1） 来源: BALB/c小鼠脑

2） 形态：内皮细胞样  贴壁生长

3） 含量：>1x10^6 细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。 

二、运输和保存 

干冰运输及复苏好存活细胞 

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 

三、培养基及培养冻存条件准备 

1）准备DMEM ( 推荐GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L) 培养基，优质胎牛血清，10%，双抗 1%。

注意：（bEnd.3细胞对培养基pH值的任何不平衡都很敏感。使用配方含有3.7 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基培养细胞时为稳定培养基PH值，增加CO2是必要的，否则这些细胞不会很好地附着或增殖，细胞建议在空气，90%、二氧化碳，10%环境中培养。经验证在空气，95%；二氧化碳，5%的环境下使用含1.5 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基会比较好，推荐使用含1.5 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基+优质胎牛血清10%来培养。

血清我们推荐FBS500-WP-002

注：具体培养方式以随货说明书为准！！！！

1）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

2）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

四、传代方法

收到细胞后，在倒置镜下(最好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

（一)如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，用力拍打瓶壁，期间每隔 5-10s放到显微镜下观察，直至50-70%的细胞脱落后，加入2ml 以上完全培养基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是一传二。

注：

1、观察细胞最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。