P815 小鼠肥大细胞瘤细胞

细胞名称:P815 小鼠肥大细胞瘤细胞

货号：WS20052（种属鉴定）

规格：1×10⁶cells/T25培养瓶

细胞介绍

P815细胞吞噬小粒乳汁但不吞噬酵母聚糖或卡介苗。 没有抗体依赖的细胞毒作用。 硫酸右旋糖苷、LPS或PPD不能抑制细胞生长。 检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。 在本库通过支原体检测。

一、细胞特性

1） 来源: 小鼠 肥大细胞；肥大细胞瘤

2） 形态：悬浮，部分轻微贴壁生长。贴壁细胞可用刮刀刮下后继续培养

3） 含量：>1x10^6 细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。 

二、运输和保存 

干冰运输及复苏好存活细胞 

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 

三、培养基及培养冻存条件准备 

1）准备1640（WS-P-0001）培养基；优质胎牛血清10 %；P/S青霉素-链霉素 1%。

注意事项：

1.复苏的P815活细胞收到之后，细胞多数呈悬浮状态，可能有些许细胞贴壁。请将全部细胞悬液转移到离心管，将剩下贴壁的细胞吹打脱壁后（刮刀刮下）一并收集，1000rpm离心5min，加入10-15ml培养液重悬后移植到2个T25培养瓶内培养。

2.传代周期：以20万细胞/ mL密度开始培养，并在培养过程中维持细胞密度在10万细胞/毫升到100万细胞/mL。

3.传代比例：以20万细胞/毫升密度开始培养，并在培养过程中维持细胞密度在10万细胞/ mL至100万细胞/ mL。

血清我们推荐FBS500-WP-002

注：具体培养方式以随货说明书为准！！！！

1）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

2）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

四、传代方法

收到细胞后，在倒置镜下(最好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

（一)如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，用力拍打瓶壁，期间每隔 5-10s放到显微镜下观察，直至50-70%的细胞脱落后，加入2ml 以上完全培养基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是一传二。

注：

1、观察细胞最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。