LOVO/5FU 人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株

细胞名称：LOVO/5FU 人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株

货号：WS-0057a（STR（lovo）鉴定）

规格：1×10⁶cells/T25培养瓶

用途：仅供科研使用

一、细胞特性

LOVO/5-FU为由LOVO细胞构建的耐5-FU药物细胞株。

1、来源：人结直肠癌细胞耐药筛选

2、形态：上皮细胞样，贴壁生长

3、细胞培养试剂的配制

1）5-FU药物的配制及保存

建议将5-FU药物配制成160mM的母液。

注意：可根据用量配制药物，并将药物分装保存，避免反复冻融导致药物失效。

2）冻存液的配制

90%优质胎牛血清+10%DMSO，现用现配。（冻存液中不含药物）

3）完全培养基的配制

胎牛血清我们推荐 FBS500-WP-002

4、细胞培养条件

气相：空气，95%；二氧化碳，5%；温度：37℃，培养箱湿度为70%~80%。

二、注意事项：

1. 收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞有污染；或冻存管有破损，融化、漏液等，请立即拍照并联系我们。照片包括细胞培养瓶/冻存管外观，显微镜下细胞照片（100倍，200倍各2张）；

2. 若收到的复苏细胞有少量细胞脱落、飘起，可能由于运输途中导致。请先于37℃恒温细胞培养箱中静置2~3h后，再进行处理；

3. 复苏细胞的充液培养基为不含药物的维持培养基，血清浓度较低，收到细胞后请及时更换为完全培养基；

4. 建议收到细胞后，首先进行扩增（至少3代），并冻存部分细胞以备用。

5. 初次培养，当细胞汇合度达约80%时，可加入含5-FU的完全培养基培养至细胞完全融合后传代。若细胞传代过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的完全培养基培养，至细胞汇合度达80%左右，且生长状态较好时，再更换为所需的5-FU药物浓度。

细胞冻存过程中，不可添加药物，且冻存液中不含药物。

三、细胞处理

1）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

注意：①细胞复苏过程中，不可使用含有药物的培养基。须在细胞生长至汇合度达80%左右时，方可添加5-FU药物；若细胞生长状态较为缓慢，可适当降低5-FU的浓度（首次降低一半药物浓度），或使用不含5-FU的完全培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的5-FU浓度。

②建议复苏细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸，造成人员伤害。

2）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

①待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养。

②弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次，吸净残余的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化2~5min，显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落，即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台，加入2倍体积的、含10%FBS的培养基中止消化。 

④将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min离心5min，弃去上清液。

⑤向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞，轻吹混匀。将细胞悬液按1：1的比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中，添加6~8mL完全培养基。

注意：若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的完全培养基培养，至细胞汇合度约80%，且生长状态较好时，再更换为所需的5-FU药物浓度。

3）细胞冻存

①细胞冻存时，步骤同2）细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

注意：细胞冻存过程中，不可添加药物。

②将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。