15371470969
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细胞名称：A549/DDP 人肺癌细胞/顺铂耐药株
货号：WS-0140a（STR鉴定）
规格：1×10⁶cells/T25培养瓶
用途：仅供科研使用
一、细胞特性
该细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系，患者为58岁白人男性。A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。A549/DDP细胞为由A549细胞构建的耐DDP药物细胞株。
1、来源：肺癌
2、形态：上皮样 多角形 贴壁生长
二、培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640（培养基；优质胎牛血清，10%；0.5ug/ml DDP , 双抗，1%。
注意：细胞复苏过程中，不可使用含有药物的培养基。须在细胞密度达约8×105个/mL时，方可添加0.5ug/ml DDP 药物；若细胞生长状态较为缓慢，可适当降低DDP的浓度（首次降低一半药物浓度），或使用不含DDP 的完全培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的DDP 浓度。
血清我们推荐 FBS500-WP-002
2)培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二、 细胞处理
1） 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
注意：细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至0.5ug/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的完全培养基培养，至细胞密度约8×105个/mL，且生长状态较好时，再更换为所需的DDP药物浓度。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
注意：细胞冻存过程中，不可添加药物。
2. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
